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反相离子对色谱法分析3',5'反向寡核苷酸

作者:骆雪芳; 陈蓉; 付静静; 胡育筑反相离子对色谱法保留行为

摘要:3',5'反向寡核苷酸是碱基组成和长度完全相同、碱基顺序相反的两个寡核苷酸序列。以三乙胺为离子对试剂,研究了缓冲液浓度(0.025~0.15mol/L)、pH(5.0~6.8)、柱温(25~45℃)、流速(0.3~0.7mL/min)以及不同初始洗脱强度和洗脱梯度条件下,6个3',5'反向寡核苷酸模拟样品保留和分离的变化特点。三组反向序列在缓冲液浓度为0.05mol/L,pH6.8和流速0.4mL/min条件下获得最大分离,温度对分离的影响不大,而初始洗脱强度对反向序列的影响远大于洗脱梯度。实验结果表明3',5'反向寡核苷酸的分离和保留趋势不完全一致,色谱条件的优化应有利于实现样品在柱上的弱保留。研究结果还显示寡核苷酸序列中5'末端的保留强于3'末端。

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色谱

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