作者：姜芹; 孙冰清; 张文刚; 顾欣粪肠球菌叠氮溴乙锭实时荧光定量pcr活菌检测饲料添加剂
摘要：利用叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide,EMA)和实时荧光定量PCR(qPCR)的结合,建立一种快速检测粪肠球菌(Enterococcus faecalis)活菌数的方法。选择粪肠球菌保守基因sodA(超氧化物歧化酶基因)作为目的基因进行qPCR方法建立;对粪肠球菌活菌和死菌进行不同浓度的EMA处理,探索最佳EMA处理浓度。结果显示,qPCR检测灵敏度为500 CFU/mL,在106~1010 CFU/mL浓度范围内,qPCR荧光信号值与活菌浓度对数值呈线性相关(R2=0.999 9),重复试验变异系数小于5%;EMA浓度为20μg/mL时,死菌的ΔCt值(加EMA-未加EMA)最大,且对活菌扩增无显著影响。试验结果表明,EMA-qPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可定向检测菌液中粪肠球菌活菌数,为粪肠球菌饲料添加剂等产品的质量控制提供技术支撑。
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