作者：程俊; 曾晓荣; 谭晓秋; 李鹏云; 文静; 毛...平面双分子层脂质膜涂抹法大电导钙激活钾通道
摘要：本研究旨在探索建立一种稳定平面双分子层脂质膜（planar lipid bilayer membranes,PLBMs）的制备方法,并尝试将大电导钙激活钾通道（large conductance calcium-activated potassium channel,BK_（Ca））蛋白融合其上进行单通道电流研究。将卵磷脂与胆固醇氯仿按3：1比例混合,用N_2吹干氯仿,制成癸烷脂质液,采用涂抹法制备PLBMs,并将BK_（Ca）重建到PLBMs上,用膜片钳研究其单通道特性。结果显示,重建到PLBMs上的BK_（Ca）的单通道的电导值为（206.8±16.9）pS,当浴液中[Ca~（2＋）]=0μmol/L时,无论超极化或去极化状态下均很少见到BK_（Ca）的通道活动。膜电位为＋40 m V时,当[Ca~（2＋）]由1μmol/L增加到100μmol/L时,通道开放概率由0.034±0.002增加到0.961±0.013,平均开放时间由（1.1±0.2）ms延长到（151.3±10.2）ms,平均关闭时间由（32.2±2.8）ms缩短为（2.1±1.8）ms;当K＋浓度为40/140 mmol/L（Cis/Trans）时,重建的BK_（Ca）反转电位在-30 mV左右。以上结果提示：（1）涂抹法可用于PLBMs的制备;（2）重建后的BK_（Ca）通道具有电导值大、电压依赖性、Ca~（2＋）敏感性和K~＋选择性;（3）PLBMs技术可用于BK_（Ca）通道的药理学和动力学特性的研究。
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