作者：杨慧; 段德义; 吴杰军; 赵春礼; 蔡青; 徐...基因治疗逆转录病毒酪氨酸羟化酶胶质源性神经营养因子thgdnf帕金森病
摘要：为了通过逆转录病毒载体ex vivo途径高效表达TH和GDNF基因.本实验构建有TH和GDNF基因的重组逆转录病毒载体pLHCX/TH和pLNCX2/(DNF,分别转染包装细胞PA317和PT67中;经筛选、RT-PCR、免疫组化等鉴定得到产毒细胞PA317/TH和PT67/GDNF.培养COS 7细胞,以两种产毒细胞的上清分别感染COS-7细胞,筛选后,免疫组化、原位杂交检测基因的表达量,将基因改造的细胞移植到大鼠纹状体内,免疫组化检测体内移植的TH、GDNF基因的表达.结果表明:TH和GDNF基因可在靶细胞表达,且筛选后基因表达阳性细胞显著增加;TH阳性率达50%,GDNF阳性率达70%.在体内实验中,可以观察到这两种外源基因可同时在大鼠脑内移植区表达.以上结果提示,TH和GDNF基因改造细胞,可通过ex vivo途径在脑内移植区高效表达.这一实验结果将对Parkinson病复合性基因治疗提供依据.
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