作者：江海洪; 向德栋; 刘国栋; 王宇明胚胎千细胞肝细胞细胞分化肝细胞生长因子小鼠胚胎干细胞体外实验研小鼠胚胎成纤维细胞碱性磷酸酶
摘要：目的:探索小鼠胚胎干细胞(ES)体外分步诱导为肝细胞的培养方法.方法:在小鼠胚胎成纤维细胞MEF饲养层上培养ES细胞,培养液中含白血病抑制因子(LIF),然后分阶段加入含acid-FGF、肝细胞生长因子(HGF)、致瘤素(OSM)、胰岛素、微量硒酸等诱导因子.采用免疫组化方法检测白蛋白(Albumin)、细胞角蛋白CK18,用硝基四氮唑蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶(ALP).结果:ES细胞克隆ALP染色阳性,未分化.培养4 d后,形成拟胚体.在分步加入诱导因子24 d后,ES细胞分化出的细胞形态比较单一,类似上皮样细胞.诱导分化的细胞可见白蛋白、CK18阳性细胞.结论:分步诱导培养有利于ES细胞向肝细胞分化.
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