作者：白桂芹; 成军; 刘妍; 刘蔚; 张树林乙型肝炎病毒x蛋白基因启动子表达活性promoterhepg2细胞上调基因表达载体
摘要：目的：研究乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白（HBxAg）对前-X基因启动子的调节作用，研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用．方法：应用聚合酶链反应（PCR）扩增HBV前X基因启动子，以T—A克隆法，将前-X基因启动子（promoter）的基因片段连入栽体pGEM—T．将获得的质粒pGEMT-前-X—promoter与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和Bgl Ⅱ双酶切后构建前-X启动子报告基因表达载体pCAT3-前-X—promoter，以重组表达质粒pCAT3-前-X-promoter分别与pcDNA3．1空载体和HBxAg表达栽体pcDNA—HBxAg瞬时转染HepG2细胞，以转染pCAT3 basic的HepG2细胞为阴性对照，48h后收获细胞．用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中氯霉素乙酰转移酶（CAT）的表达活性，以了解HBxAg对前X基因启动子的调节作用．结果：构建的报告载体pCAT3-前-X—promoter经过序列分析和酶切鉴定正确．真核表达载体pcDNA3.1（-）-X和pCAT3-前-X-promoter共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是CAT3启动子的3．12倍，是pCAT3-前-X—promoter的2.65倍，是pCAT3—3.1空载体和pCAT3-前-X—promoter共转染的2.28倍，结论：HBxAg可以上调乙型肝炎病毒基因组中前-X基因启动子的活性．
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