作者：张春晶; 周宏博; 邹朝霞; 董钦; 于海涛分子克隆蛋白基因人脐静脉内皮细胞原核融合表达载体cdna序列原核表达载体限制性内切酶氧大肠杆菌重组质粒基因编码区核苷酸序列氨基酸序列序列测定阳性克隆诱导表达
摘要：目的:克隆人脐静脉内皮细胞谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)编码区的cDNA序列并进行序列测定,构建原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.方法:从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,采用RT-pCR技术,获得该基因编码区的cDNA,并重组入原核克隆表达载体pRSETA,构建重组质粒pRSET-Grx,通过菌落PCR筛选及限制性内切酶鉴定,选择阳性克隆并测序.将测序正确的重组质粒pRSET-Grx 转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.结果:将所得序列与GenBank提供的序列(NM002064)比较,测出的序列在核苷酸序列上有一处碱基不同,但在氨基酸序列上与已知序列一致.经IPTG诱导4-5 h后,150 g/LSDS-PAGE分析,表达出Mr16000的蛋白.结论:从人脐静脉内皮细胞中成功地获得Grx编码区的cDNA,成功构建了原核融合表达载体pRSET-Grx并获得表达.
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