作者：王春花; 成军; 郎振为; 李蕴茹; 闫杰; 张...大肠杆菌纯化westernblot表达载体单克隆抗体特异性免疫生物学特性x蛋白重组质粒原核表达诱导表达表达产物基因片断
摘要：目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白,并进行纯化和鉴定.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)获得HBV前-X基因,将前-X克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),考马斯亮蓝染色.采用凝胶电泳回收纯化.经Western blot.结果:成功扩增获得HBV的前-X编码基因片断,并构建大肠杆菌表达载体.表达载体转化的大肠杆菌经过IPTG的诱导,裂解,SDS-PAGE,结果显示得到了目的蛋白Mr27000.以抗-His的单克隆抗体进行的western blot杂交实验,结果表明表达、纯化的目的蛋白具有特异性免疫反应识别.结论:成功表达HBV的前-X蛋白,对于研究HBV的前-X蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了坚实的基础.
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