作者：孙保存; 臧凤琳; 牛瑞芳; 魏熙胤; 赵秀兰...flip干扰性小rnarna片段mrna水平fas介导annexindna降解片段rna干扰技术凋亡敏感性基因mrna干扰作用电穿孔技术sirna癌基因治疗特异性体外培养凋亡途径抗体激活
摘要：目的:研究对应FLIP基因的siRN段对大肠癌细胞株HT-29凋亡的影响,明确FLIP在Fas介导的凋亡途径中的作用.方法:体外培养大肠癌细胞HT-29,通过电穿孔技术将特异性siRN段转染入细胞,半定量RT-PCR法判断干扰前后FLIP mRNA水平的变化,分析RNA干扰的特异性、时效性,并比较对应不同位点的两个siRN段对FLIP的干扰效果.经凋亡诱导型抗体激活后,以Annexin V染色法及DNA降解片段检测分析干扰前后HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性的改变.结果:特异性siRN段能有效降低FLIP mRNA水平,最大干扰效率达65.02%,明显高于作为对照的非相关片段;干扰作用于转染后24 h即可出现,48 h达高峰,72 h稍有降低;对应不同位点的两个siRN段对FLIP均可产生干扰作用,彼此间差别不大.在诱导型抗体的刺激下,与未转染细胞相比,转染siRNA的HT-29细胞中凋亡细胞所占比例明显增加.结论:特异性siRN段可显著降低FLIP基因mRNA的表达水平,并提高HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性.以FLIP为靶点的RNA干扰技术可望成为大肠癌基因治疗的新方法.
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
