作者：汤正好; 马会慧; 臧国庆; 余永胜; 李刚; ...缺陷型腺病毒载体体外表达基因复制人源性抗hbc单链抗体scfv基因复制缺陷型腺病毒elisa法检测dna重组技术重组腺病毒载体hepg2细胞病毒核心蛋白目的基因构建表达真核细胞293细胞乙型肝炎穿梭质粒基因克隆
摘要：目的:构建表达抗乙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体(抗HBc ScFv)的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其能否在真核细胞中有效表达目的基因.方法:采用DNA重组技术将特异性人源性抗HBc单链抗体基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与5型腺病毒骨架质粒pAdeasv-1共转染BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒载体pAd-ScFv,经脂质体法转染293细胞,包装产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒Ad-ScFv,体外转染HepG2细胞,PCR和ELISA法检测目的基因及其表达.结果:构建了表达抗HBc ScFv基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度达4×1015PFU/L,并能在真核细胞中有效表达目的基因.结论:成功构建表达抗HBc ScFv的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步开展抗HBc ScFv在抗HBV基因治疗中的作用研究提供实验基础.
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