作者：王宁; 陈洋; 郭仁宣; 郭克建生物人工肝脏能力安定细胞构成hepg2细胞western杂交细胞色素p450谷氨酰胺合成酶体外细胞数量代谢产物转基因技术hplc法原代肝细胞4细胞循环器氨浓度代谢活性细胞基础免疫组化细胞接种过表达cyp
摘要：目的:为增强HepG2细胞的氨和苯二氮(艹卓)类代谢活性,在Enosawa et al的HepG2-GS细胞基础上以转基因技术,建立一种谷氨酰胺合成酶(glutamine syhetase,GS)和细胞色素P450 3A4(CYP 3A4)都过表达的HepG2-GS-3A4细胞.并在人工肝脏循环器中培养此细胞,以检测此人工肝脏的氨和安定(Diazapam,DZP)的代谢率.方法:以Western杂交和免疫组化等方法证实CYP 3A4蛋白过表达后,将HepG2-GS-3A4细胞接种于一种人工肝脏循环器,待细胞数量增至足够后,充入含NH4Cl和安定的培养液,孵育24 h,定时取样,分别以Berthelot反应法检测氨浓度,以HPLC法检测DZP及其代谢产物.结果:CYP 3A4蛋白在HepG2-GS-3A4细胞中表达显著强于HepG2细胞(P=0.02).在接种有HepG2-GS3A4细胞的生物人工肝脏循环器中与HepG2细胞和无细胞组相比,氨浓度明显降低(P=0.04),氨浓度约降低约31.7%;DZP浓度也明显降低(P=0.03),且有DZP的代谢产物生成产生,DZP浓度约降低36.7%.结论:接种有HepG2-GS-3A4细胞的生物人工肝脏有明显的DZP和氨的代谢能力,代谢能力虽弱于文献中的猪原代肝细胞,但具有性质稳定,易于传代和储存,获取细胞数量不受限制等优点.
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