作者：刘秀丽; 张兆山; 陶好霞; 展德文; 刘纯杰幽门螺杆菌表达与纯化a亚基原核表达载体hspa基因hspapcr扩增免疫印迹检测免疫印迹实验高效表达亲和层析热休克蛋白亚单位疫苗大肠杆菌表达产物page纯化过程免疫实验抗原性镍离子sds总蛋白表达量
摘要：目的:利用原核表达载体高效表达幽门螺杆菌热休克蛋白A(HspA),并进行纯化.方法:PCR扩增hspA基因,将其克隆至原核表达载体pET22b,pQE-60,pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析表达.利用镍离子亲和层析对表达产物进行纯化.免疫印迹检测蛋白的抗原性.结果:PCR扩增得到hspA基因,在载体pQE-60中以HspA和HspA-His6两种形式得到表达,表达量高达菌体总蛋白的40%以上.经镍离子亲和层析后,纯化率分别为88.63%和86.32%,但HspA-His6在纯化过程中发生降解.免疫印迹实验表明,HspA和HspA-His6都有很好的抗原性.结论:实现了HspA蛋白的高效表达和纯化,为幽门螺杆菌HspA亚单位疫苗的免疫实验奠定基础.
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