作者：余少鸿; 严律南; 周绍兵; 张燕; 苟兴华; ...微球重组腺病毒转染hepg2adm反义rna逆转包被红色荧光表达
摘要：目的:构建携带反义多药耐药相关蛋白(MRP)基因的重组腺病毒微球,了解包载反义RNA重组腺病毒微球逆转肝细胞癌MRP的治疗效果.方法:采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA)包被携带反义MRP基因的重组腺病毒制成微球,体外测定微球的粒径、载病毒量、包封率及释放规律,并用其转染人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM,48 h及120 h后检测转染细胞荧光强度.MTT法检测耐药细胞的阿霉素半数致死量(IC50);流式细胞仪检测细胞内红色荧光强度;以β-actin为内参照,以RT-PCR法观察转染后MRPmRNA表达量的高低.观察经肝动脉注射rAdV微球后肿瘤体积大小、生长率及平均生存时间.结果:成功构建了携带反义MRP基因的重组腺病毒微球,直径约1.765μm,包封率为52.4%,载病毒率为5.5×1011efu/g,在120 h内释放病毒量接近50%,总的释放时间长于240 h.释放出的病毒保持活性,10 mg微球48 h对HepG2/ADM耐药细胞株转导效率可达90%以上.HepG2/ADM细胞48 h及120 h阿霉素IC50为9.72,4.15 ug;以HepG2细胞内DNR的荧光强度为对照,rAdv微球组转染后120 h与HepG2/ADM及rAdv组比较,细胞内DNR浓度有所升高(168.6±6.97 vs 98.39±6.17;168.6±6.97 vs 112.52±9.21,t=13.68及9.69,P=0.001及0.001＜0.01).诱导后HepG2/ADM MRP高表达,转染Adv微球后48 h及120 h,MRPmRNA的表达强度较转染前明显降低,以120 h表达最弱.转染Adv微球后120 h与48 h相比,MRPmRNA/β-ac血的比值分别较转染前降低16.7%及63.6%;120 h较转染AdV48 h表达降低26.25%.治疗组vs对照组,生理盐水组,空白微球组及rAdv组(n=4),肿瘤生长率显著降低(0.96±0.25 vs 8.79±0.34;4.82±0.30;4.67±0.67;2.97±0.29,t=36.10,24.43,1 2.28及1 3.81,P=0.0001,0.0009,0.001及0.001＜0.05).平均生存时间显著延长(43.6±7.4 vs 23.4±3.2;25.3±3.7;26.5±4.1;33.7±2.9,t=5.521,4.599,4.522,2.796,P=0.005,0.007,0.007及0.049＜0.05).结论:聚乳酸-聚乙烯醇共聚物(PELA)包载反义RNA重组腺病毒制备的微球,可有效�
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
