作者：郭江; 成军; 纪冬; 赵龙凤; 王建军; 刘妍...抑制性消减杂交技术克隆筛选hcvp7蛋白反式调节基因
摘要：目的：构建丙型肝炎病毒HCV p7蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA，克隆HCV p7蛋白反式激活相关基因．方法：以HCV p7表达质粒pcDNA3．1(-)-p7转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为对照；制备转染后的细胞裂解液，从中提取mRNA并合成cDNA，经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析．结果：成功构建人HCV p7蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA．扩增后得到56个200-1000bp插入片段的克隆，随机挑选其中33个插入片段测序，并通过生物信息学分析获得其全长基因序列，结果共获得15种编码基因，其中1个为未知功能的新基因．结论：筛选到的cDNA全长序列，包括与细胞生长调节、物质代谢、和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因．
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
