作者：王春花; 郎振为; 成军; 吴煜; 杨艳杰; 张...抑制性消减杂交技术筛选hbvdna聚合酶rnaseh反式调节基因大肠杆菌
摘要：目的：应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建HBV DNA聚合酶(DNAP)末端蛋白反式激活基因。方法：以RNase H表达质粒pcDNA3．1(-)-RNaseH转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为对照；制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，经RsaI酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析．结果：文库扩增后得到38个白色克隆，经菌落PCR分析，得到36个200-1000bp插入片段．对所得片段测序，并进行同源性分析，显示33种已知基因编码蛋白和3种未知功能基因序列，可能是RNase H反式激活靶基因．结论：成功构建HBV RNase H反式激活基因差异表达的cDNA消减文库．
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