作者：李强; 梁耀东; 成军; 王琳; 张建; 邵清; ...酵母双杂交技术白细胞ns5atp9蛋白抑制性消减杂交技术ssh编码基因酵母细胞
摘要：目的：我们在以往的研究中，应用抑制性消减杂交技术(SSH)筛选得到了丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9(NS5ATP9)，NS5ATP9是一种未知功能新基因，为了进一步研究NS5ATP9的生物学功能，应用酵母双杂交技术，筛选并克隆人白细胞中与NS5ATP9蛋白相互作用蛋白的基因，进一步阐明NS5ATP9的生物学功能及其作用途径。方法：用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS5ATP9基因，连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人白细胞cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落并测序，进行生物信息学分析。结果：成功克隆出NS5ATP9基因并在酵母细胞中表达，配合后选出既能在四重缺陷(SD／-Trp-Leu-Ade-His)培养基上生长，又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上变蓝的真阳性菌落46个，其中含人类免疫球蛋白轻链13个，核小体表面蛋白10个，铁蛋白重链2个，人类重组免疫球蛋白入轻链11个，14-3-3家族蛋白1个，脑膜炎球菌PorA蛋白1个，RNA多聚酶Ⅲ3个，烟草有丝分裂原激活蛋白激酶1个，细胞色素P450 Ⅱ 2个，SLIT2蛋白1个，DNA依赖
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