作者：王建军; 纪冬; 成军; 刘妍; 杨倩; 党晓燕...抑制性消减杂交技术ssh双环醇调节靶基因肝细胞
摘要：目的：应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)技术构建双环醇处理的人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库，筛选并克隆双环醇调节相关基因，阐明双环醇对肝细胞调节作用的分子生物学机制。方法：以双环醇处理HepG2细胞，同时以二甲基硫氧化物(DMSO）处理的相同细胞系作为对照；24h后制备细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，经RsaⅠ酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应(PCR)，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果：成功构建双环醇处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库，文库扩增后得到46个白色克隆，进行菌落PCR分析，均得到200-1000bp插入片段，挑取含有插入片段的30个克隆进行测序，并通过生物信息学分析获得14种已知基因序列，结论：应用SSH技术成功构建了双环醇处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库，该文库的建立为进一步阐明双环醇在体内的调节机制提供依据。
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