作者：党晓燕; 成军; 邓红; 王建军; 杨倩; 刘妍...抑制性消减杂交技术克隆hcvns3蛋白反式激活基因2上调基因细胞凋亡
摘要：目的：应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库，克隆HCV NS3蛋白反式激活相关基因。方法：以HCV NS3表达质粒pcDNA3．1(-)-NS3转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为对照：制备转染后的细胞裂解液，从中提取mRNA并合成cDNA，经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果：成功构建人HCVNS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库，文库扩增后得到61个白色克隆，进行菌落PCR分析，均得到100-1000bp插入片段,挑取30个插入片段测序分析，得到30个已知功能基因序列。结论：筛选到的cDNA全长序列，包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因，推测了NS3TP2可能存在的调控机制的线索。
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