作者：艳丽; 刘志瑾; 魏辅文; 李明微卫星基因组文库筛选小熊猫
摘要：微卫星基因位点是在各个遗传学领域被广泛使用的分子标记.而对于首次研究的物种,必须筛选出可以应用的微卫星位点.对于分离微卫星位点来说由于只有大约0.5%～2%的重组体含有微卫星位点,所以标准的基因组文库需要至少产生5 000个重组体.传统的筛选方法就是通过检测大量重组体来定位这些少量的位点.近几年来出现了一些新的筛选方法,采用"富集"微卫星序列的技术将包含微卫星位点的重组体比例提高了10～100倍.这样就降低了筛选工作的时间和劳动强度,大大提高了筛选微卫星位点的效率.本文在结合了几种筛选微卫星位点技术路线的基础上,采用生物素标记探针杂交、富集和PCR筛选技术,对原有技术路线进行了改进.主要实验步骤为:1)基因组DNA的提取和消化;2)生物素标记探针富集;3)克隆建库;4)"PCR"筛选;5)引物设计和多态性检测.新的方法在小熊猫微卫星基因文库的构建中取得成功,获得了10个具有多态性的(CA)n重复序列微卫星位点.
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