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人源性Notch1跨膜段真核表达载体的构建及鉴定

作者:张凯举 余和芬 张玉祥notch信号ntm人胰腺癌真核表达载体

摘要:目的构建人源性Notch1跨膜段(notch1 transmembrane domain,NTM)真核表达载体pcDNA3-NTM,并观察其在真核细胞中的表达。方法通过反转录.聚合酶链反应从人胰腺癌细胞系BxPC3细胞中获得编码Notch1跨膜段的cDNA,定向克隆至C端带flag蛋白标签序列的真核表达载体pcDNA3中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内Notch1跨膜区的表达。结果构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,将其转染HeLa细胞48h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内Notch1跨膜段的表达显著增高。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,为研究Notch信号的活化机制及其在胰腺癌发生发展中的作用奠定了基础。

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首都医科大学学报

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