作者：王雪银; 宋献美; 马云云小干扰rna半胱氨酸蛋白酶3内毒素肝细胞细胞凋亡细胞增殖
摘要：目的观察利用小干扰RNA（siRNA）抑制Caspase-3表达对内毒素诱导肝细胞凋亡的影响。方法针对Caspase-3的DNA序列843~1 634 bp设计引物,常规分子克隆至慢病毒表达载体p Lenti-7.1,同时设置空载体为阴性对照;利用Lipofectamine 2000转染至293T细胞,48 h后收获抑制Caspase-3表达病毒质粒V-Caspase-3和空载体病毒质粒V-control。将肝细胞HL7702随机分为观察组和对照组,分别加入V-Caspase-3、V-control培养4 h,均与终浓度为20 mg/L的内毒素共培养12 h。采用Western blotting法检测Caspase-3蛋白,流式细胞术测算细胞凋亡率,原位末端标记技术测算细胞凋亡指数（AI）,MTT法观察细胞增殖活力。结果观察组HL7702细胞Caspase-3相对表量为17.32±2.16,低于对照组的62.14±4.36（P〈0.01）;观察组HL7702细胞凋亡率为28.75%,低于对照组的72.67%（P〈0.01）;观察组HL7702细胞AI为23.52±1.24,低于对照组的54.26±1.87（P〈0.01）;观察组HL7702细胞增殖率为65.47%±6.24%,高于对照组的41.39%±4.87%（P〈0.01）。结论通过siRNA抑制Caspase-3表达能有效降低内毒素诱导的HL7702细胞凋亡,从而增强细胞增殖活性。
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