作者：赵志敏; 王国坤; 王杨; 杨帆; 龚德军; 徐...血管平滑肌细胞胸主动脉胶原酶消化法组织块贴壁法细胞生长细胞增殖细胞分化大鼠
摘要：目的比较胶原酶消化法、组织块贴壁法培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（RASMCs）生长、增殖及分化的影响。方法选择6～8周龄雄性SD大鼠6只,取胸主动脉及主动脉弓部,保留中膜备用。分别采用胶原酶消化法、组织块贴壁法培养RASMCs。采用α-肌动蛋白免疫荧光染色法鉴定RASMCs,并比较两种方法培养第0、24、36、48、60、72、84、96 h RASMCs生长情况。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期。采用实时定量PCR法检测细胞表型标志基因表达,包括收缩型标志基因α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转胶蛋白（TAGLN）、肌球蛋白重链11（MYH-11）、转录因子1（SP-1）及合成型标志基因骨桥蛋白（OPN）。结果胶原酶消化法、组织块贴壁法均成功分离出RASMCs,细胞纯度均在95%以上。培养36、48、60、72 h时,组织块贴壁法分离、培养的RASMCs计数多于胶原酶消化法（P均〈0.05）。培养36、48、60、72 h时,胶原酶消化法分离、培养的RASMCs活力优于组织块贴壁法（P均〈0.05）。两种方法分离、培养的RASMCs G1、G2、S期细胞所占比例比较差异均无统计学意义（P均〉0.05）。胶原酶消化法分离、培养的RASMCs中α-SMA、TAGLN、MYH-11 mRNA相对表达量均高于组织块贴壁法,OPN mRNA相对表达量低于组织块贴壁法（P均〈0.05）。结论胶原酶消化法、组织块贴壁法均成功分离、培养出RASMCs。胶原酶消化法分离、培养的RASMCs生长、增殖较慢,但保持收缩表型;组织块贴壁法分离、培养的RASMCs生长、增殖较快,但有向合成表型转化的趋势。
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