作者:朱元祺; 秦萍; 黄伟丽; 王斌原核表达成熟肽
摘要:从经脂多糖刺激的外周血单核细胞中提取mRNA,RT-PCR扩增出白细胞介素-15(IL-15)成熟肽前体蛋白基因,将其插入到质粒pGEX-4T-2编码谷胱肽转移酶(GST)的多克隆位点(MCS),构建原核表达克隆(PGEX-4T-2/IL-15);重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白图谱,Western blot鉴定表达蛋白.结果成功构建了pGEX-4T-2/IL-15原核表达克隆,经IPTG诱导,转化的大肠杆菌表达出相对分子质量(Mr)为42×103Daltons的融合蛋白,且该蛋白能与抗IL-15抗体发生特异性结合反应.本研究可为进一步研究IL-15的生物学功能和临床应用奠定基础.
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