作者：张溪; 崔保霞; 马道新; 孔北华卵巢肿瘤cd137l人端粒酶逆转录酶基因疗法
摘要：目的研究hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在人卵巢癌细胞系中的表达，探讨CD137L靶向基因治疗的可行性。方法采用RT-PCR法从K562细胞中克隆CD137L全长基因，将其克隆到真核表达载体pcDNA3中，构建的质粒为pcDNA3-hCD137L，用HindⅢ和XbaⅠ双酶切后将CD137L再定向插入pBTdel-279中，构建成hTERT启动子调控下CD137L表达载体pBTdel-279-hCD137L，采用酶切法和测序法鉴定。用Fugene6转染试剂盒将两种重组质粒分别瞬时转染人卵巢癌细胞株OVCR3和人胚肺成纤维细胞株HELF，RT—PCR和流式细胞仪检测CD137L的表达。结果测序证实所克隆的CD137L基因序列与GENE—BANK中的序列相符。经限制性内切酶酶切，电泳后显示片段插入正确，证实构建成功。pcDNA3-hCD137L转染后OVCR3细胞和HELF细胞均可检测到CD137L的表达，但pBTdel-279-hCD137L转染后仅在OVCR3细胞中检测到其表达，在HELF细胞中无表达。流式细胞显示pBTdel-279-hCD137L转染效率低于pcDNA3-hCD137L。结论hTERT启动子调控下CD137L表达载体构建正确，并可在卵巢癌细胞中较高表达，为探讨靶向基因治疗提供了实验依据，但hTERT启动子活性仍低于CMV启动子。
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