人胰岛素原基因在大肠杆菌中的表达和纯化

作者：张晓玮 彭振英 陈高 郑玲 于金慧 毕玉平 ...胰岛素原密码子优化大肠杆菌表达

摘要：将人胰岛素原基因序列（human proinsulin,PI）经密码子优化后与Trx A蛋白融合表达,构建原核表达载体Trx A-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）、Trans B（DE3）和Rosetta-gami（DE3）中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami（DE3）中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21（DE3）表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白Trx A-PI在Rosetta-gami（DE3）菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。Trx A-PI用肠激酶酶切后,利用His Trap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。

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