利多卡因对人角膜上皮细胞的毒性作用及其机理研究

作者：苗莹 王瑞鑫 于昊泽 于苗苗 葛源 樊廷俊人角膜上皮细胞利多卡因细胞毒性细胞凋亡dna断片化

摘要：利用不同浓度利多卡因（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）处理体外培养的人角膜上皮（ＨＣＥＰ）细胞系细胞，利用光镜观察、ＭＴＴ、荧光染色、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ、流式细胞仪和透射电镜方法研究了利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞的毒性作用及其机理。光镜观察和 ＭＴＴ检测结果显示，质量浓度 １２５～１０００ｇ／Ｌ的利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的毒性作用，并具有浓度和时间依赖性；ＡＯ／ＥＢ荧光双染色结果显示，质量浓度 ０６２５～１００００ｇ／Ｌ的利多卡因可引起 ＨＣＥＰ细胞的质膜通透性显著提高，细胞凋亡率也具有浓度和时间依赖性；ＤＮＡ电泳和 ＴＵＮＥＬ检测结果显示，利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞发生 ＤＮＡ断片化；ＴＥＭ观察结果显示，利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞的超微结构出现了凋亡细胞的形态结构特征，如胞质空泡化、染色质浓缩、线粒体膨胀且嵴的结构紊乱、出现凋亡小体等；ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ染色的流式细胞仪检测结果显示，利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞质膜中的磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）发生外翻变化；ＥＬＩＳＡ检测结果显示，利多卡因还能引起 ＨＣＥＰ细胞中胱冬肽酶3、8、9、10表达量的增加，表明利多卡因确能引起 ＨＣＥＰ细胞发生细胞凋亡，而不是细胞坏死。由此可见，利多卡因在质量浓度大于 0.625ｇ／Ｌ时对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的细胞毒性，并具有浓度和时间依赖性，且其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的，在眼科临床应用中具有很大的毒副作用，应谨慎使用。

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