用差减cDNA文库筛选由热激导致的小鼠睾丸中差异表达的基因

作者：曹慧仁 杨永杰 杜一 王登宇 孔维华小鼠睾丸组织差减cdna文库热敏感基因

摘要：采用抑制性差减杂交（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）方法，构建正常和热激小鼠睾丸组织的差减cDNA文库，以期筛选出小鼠生精过程中对热敏感的基因。分别从正常和热激小鼠睾丸组织提取总RNA，反转录成cDNA，以正常小鼠睾丸组织cDNA作为待检组织（tester），以热激小鼠睾丸组织cDNA作为驱动组织（driver），经过2轮杂交和抑制性PCR扩增，产物与T载体连接，经蓝白斑筛选，提取质粒，经EcoRI酶切鉴定插入片段并测序，由此构建了2种组织间差异表达基因的差减cDNA文库。用半定量RT-PCR方法，进一步验证了该文库中差减出的基因基本上为差异表达的基因。对随机挑选其中的932个克隆测序，对有效测序的565个基因序列与GenBank数据库中的序列进行同源性比较，大部分片段都可以检索到同源序列。结果显示，cPGES／p23等13个基因热激后表达量上调；septin2等120个基因热激后表达量下调。其中cPGES／p23为本研究中首次发现的小鼠生精过程中对热敏感的基因。

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