农杆菌介导的DREB1A基因转化多花黑麦草及其转化体系的优化

作者：李子东 赵翠珠 周玲君 刘艳玲 向凤宁 夏...多花黑麦草dreb1a基因根癌农杆菌遗传转化

摘要：采用携带卡那霉素抗性基因nptⅡ和GUS基因的ubiquitin启动子驱动的表达载体pB1121／DREB1A的根癌农杆菌AGL1，对多花黑麦草幼胚来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化，并优化了各种影响因素。胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后，用50mg／L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织，待抗性愈伤组织在IB分化培养基上分化成苗后用25mg／L卡那霉素进一步筛选再生植株，获得了部分抗性植株。抗性植株的总DNA用DREB1A基因的特异引物进行PCR检测，转化频率为2．14％，PCR-Southem blot进一步验证了转化植株基因组中含有该外源基因。各种影响转化效率因素的优化实验表明，当转化时菌液浓度的OD600为2．0、侵染时间为1h、共培养时间为2d、共培养温度为21℃及在共培养期间使用乙酰丁香酮等，均可明显提高转化频率。

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