Paenibacillus sp．K1 β-半乳糖苷酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

作者：陆文伟 孔文涛 孙芝兰 孔健 季明杰类芽孢杆菌dna文库

摘要：从鲜牛奶中分离到1株产β-galactosidase的细菌，经16S rDNA序列比对鉴定为类芽孢菌Paenibacillus sp．K1。提取该菌株的染色体DNA，以pUC18（lac^-）为载体，构建其DNA文库；在含有X-gal的LB平板上筛选该文库，得到6个蓝色菌落；对阳性克隆中插入的DN段序列测定，鉴定出1个编码全长为2028bp并携带有组成型启动子的β-半乳糖苷酶基因。将该基因导入大肠杆菌B121（DE3）中，实现了β-半乳糖苷酶高效表达，其酶活为25．06U／mL，高于原始菌株的4．55U／mL，并进一步用亲和层析将该酶进行了纯化。

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