作者:丁东 熊云 方勇新 林标扬对虾白斑综合征病毒传染性皮下和造血器官坏死病毒pcr胶体金免疫赏析同步检测
摘要:为了快速、方便地检测出这2种病毒,研究将PCR核酸扩增的高灵敏度和胶体金免疫层析技术快速、简便、直观的优点结合起来,建立了同时检测2种对虾病毒(WSSV和IHHNV)的同步PCR-胶体金免疫层析检测方法.采用了生物素标记和地高辛(Digoxigenin)标记引物.PCR扩增产物利用胶体金免疫层析技术进行检测.胶体金免疫检测试剂条的检测线(T线)处的层析膜处点上地高辛的单抗,经地高辛标记的PCR扩增产物可在T线上被检测到,在10 min内即可得到检测结果.同时,在PCR过程中使用UNG(尿嘧啶-DNA糖基酶),极大地控制了遗留污染.通过此方法检测对虾WSSV和IHHNV病毒的灵敏度均可达到10~100个拷贝,高于国家标准PCR检测法10~100倍.此检测方法让工作人员避免了接触有毒和诱导突变的试剂,免除基层检测实验室购买电泳设备和荧光检测系统的投资.
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