作者：刘问; 钱冬; 吴建翔; 邵健忠罗氏沼虾肌肉白浊病罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体三抗体夹心酶联免疫吸附测定
摘要：罗氏沼虾肌肉白浊病(whitish muscle disease of Macrobrachium rosenbergii)是一种发生在罗氏沼虾苗种阶段的流行病,发病虾苗出现肌肉白浊、白斑或白尾症状,死亡率高达60%以上.作者所在实验室在确定其病原是罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus, MrNV)的基础上,用MrNV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,得到12株能特异分泌抗MrNV的单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞.注射小鼠,制备腹水单克隆抗体,ELISA效价为1∶105～106.亚型鉴定结果表明,有6株单抗为IgG1型,4株单抗为IgG2a型,2株单抗为IgG2b型.12株单抗与对虾白斑综合征病毒(WSSV)和桃拉综合征病毒(TSV)均无交叉反应.挑选效价高的腹水单抗2B5,建立了检测罗氏沼虾诺达病毒的三抗体夹心酶联免疫吸附测定(TAS-ELISA)法, 该方法检测灵敏度达0.98 ng左右.Wesrtern blot分析表明,2B5能与MrNV 43kD的外膜蛋白特异性结合.
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