作者：刘建; 朱光琼; 丁九阳; 周播江骨髓源性侧群细胞干细胞流式细胞分选肝细胞生长因子
摘要：目的 （1）过观察骨髓源性侧群细胞（BMSP）在体外培养条件下能否保持侧群细胞的特性,以探讨BMSP在体外扩增的可能性。（2）观察在肝细胞生长因子定向诱导下大鼠BMSP转分化情况,初步探讨肝细胞生长因子在大鼠BMSP转分化为肝样细胞中发挥的作用及机制。方法 （1）从大鼠的股骨和胫腓骨分离骨髓细胞并制备骨髓细胞悬液,通过流式细胞仪分选获取BMSP;用低糖DMEM＋10%FBS培养基培养BMSP。采用RT-PCR检测细胞中ABCG-2基因表达水平。（2）在体外向BMSP中加入不同浓度的肝细胞生长因子诱导其向肝样细胞分化,并分别于第3、7、14、21天,通过RT-PCR、免疫印迹等技术检测ALB、AFP细胞表面标志物的表达情况。结果 （1）每只SD大鼠的双侧股骨和胫腓骨所制备的骨髓细胞悬液的细胞总数约2-10×10^8个,经分选可获得5-10×10^5个BMSP。（2）BMSP在体外培养6小时后开始贴壁生长,细胞形态以长梭形为主。第7天细胞按1∶2传代培养,传代后细胞于24小时内完全贴壁,细胞传至第10代时,细胞增殖能力仍然很强。（3）诱导分化实验表明：一定浓度的肝细胞生长因子具有明显的促进BMSP转分化为肝样细胞。RT-PCR检测显示：培养第3天的BMSP空白组及因子组的未见AFP、ALB mRNA表达;第7天的因子组见AFP mRNA表达、ALB mRNA不表达,空白组AFP、ALB mRNA均未表达;第14天的因子组见AFP mRNA表达减弱、ALB mRNA表达,空白组AFP、ALB mRNA均未表达;第21天因子组见AFP mRNA不表达、ALB mRNA表达减弱,空白组AFP、ALB mRNA均未表达。结论 （1）通过流式细胞仪分选获得BMSP在一定时间内可以在体外扩增并保持干细胞的特性,且传代的BMSP仍具有很强的自我更新和增殖能力。（2）扩增的BMSP在肝细胞生长因子的诱导下可以逐渐向肝样细胞分化。
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