作者：赵远; 冯玉超; 苏艺伟; 张维森; 刘移民毛细胞氧化损伤
摘要：目的 观察酸性成纤维细胞生长因子（FGF-1）和miR-133a在HEI-OC1耳蜗毛细胞氧化凋亡过程中的表达,探讨miR-133a对FGF-1的调控机制及其在毛细胞氧化损伤过程中的作用。方法 应用叔丁基过氧化氢（t-BHP）致耳蜗毛细胞氧化损伤细胞模型模拟毛细胞受到噪声刺激后的氧化损伤过程,设50、100、200μmol/L三个染毒组和未染毒对照组。提取细胞总RNA和总蛋白,采用qRT-PCR以及Western blot检测miR-133a和FGF-1表达水平,检索生物信息学网站,对FGF-1 3’-UTR区上miR-133a可能作用的靶序列进行预测分析;脂质体转染miR-133amimics入耳蜗毛细胞内,采用q RT-PCR和Western blot分别检测转染后FGF-1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 qRT-PCR结果显示,t-BHP处理组FGF-1 mRNA的表达为对照组1.32倍（P〈0.05）、1.67倍（P〈0.05）和2.64倍（P〈0.001）,且随着染毒浓度的升高呈增加的趋势（F=9.231,P〈0.05）;同时miR-133a表达均有所降低,分别为对照组的0.81倍（P〈0.05）、0.68倍（P〈0.05）和0.37倍（P〈0.05）,且随着染毒浓度的升高呈降低的趋势（F=17.63,P〈0.05）。脂质体转染miR-133a mimics,50、100、200μmol/L的转染组miR-133a表达分别为对照组的767、1 499和1 607倍,差异有统计学意义（P〈0.05）。miR-133a mimics转染组FGF-1的mRNA和蛋白表达水平均低于对照组,同时miR-133a inhibitors转染组FGF-1的mRNA和蛋白表达水平均高于对照组。软件预测结果显示,在多个物种中靶序列（FGF1-3′UTR上第356-363位核苷酸）在物种之间十分保守,其种子区域完全互补。结论 FGF-1的表达受miR-133a的调控,FGF-1基因的356-363碱基区域可能为miR-133a的识别元件。
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