作者：邱峰; 刘振杰; 陈富尿激酶型纤溶酶原激活因子克隆原核表达
摘要：目的构建尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）原核表达质粒，并在大肠埃希菌BL21中表达，为进一步研究uPA奠定基础。方法应用逆转录RT—PCR，从人肝细胞cDNA中扩增人尿激酶型纤溶酶原激活因子基因序列，与原核表达质粒pET32a重组，获得表达质粒uPA—pET32a。用氨苄青霉素平板筛选转化子。双酶切与DNA测序进行鉴定，用IPTG诱导表达，并用Westernblotting进行鉴定。结果从肝细胞cDNA中扩增的uPA基因片段长1296bp，酶切及DNA测序证实uPA-pET32a重组质粒构建正确，表达融合蛋白分子量约为68900Mr，经Western blotting证实为目的蛋白。结论成功构建了重组原核表达质粒uPA—pET32a。并能在大肠埃希菌内表达，所表达的融合蛋白分子量大小与预期的相一致．为进一步的研究奠定了基础。
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