作者：赵宁; 郭中敏; 陈系古egfp基因逆转录病毒载体转染
摘要：目的构建携带有绿色荧光蛋白（GFP）基因的逆转录病毒载体，观察该报告基因在动物体内外表达情况以及对靶细胞生物特性的影响。方法以质粒pEGFP-C。为模板进行PCR反应，获得增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因片段，定向插入逆转录病毒载体pLXSN获得重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP，转染PA317包装细胞后收集具有感染能力的病毒颗粒，转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2，通过荧光显微镜和流式细胞仪观察EGFP作为报告基因在体内外的表达情况以及对靶细胞生物特性的影响。结果成功克隆携带有EGFP基因的逆转录病毒载体，该载体经包装细胞包装后可有效转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2并在体内外稳定表达，对靶细胞及其所成肿瘤的生长无抑制。高表达GFP的靶细胞形态变得细长，FACS检测约有98％的细胞表达GFP，体外培养6个月荧光强度没有明显的衰减，而低表达GFP的靶细胞形态无变化，FACS检测有30．7％细胞表达GFP。结论该载体可在体内外成功表达，对靶细胞的生长无明显抑制，高表达GFP的靶细胞有一定形态上的变化：使用GFP作为报告基因，检测到的病毒载体转染率比实际偏低。
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