作者:庾蕾; 刘建平; 庄志雄; 杨淋清; 张仁利; ...相对定量标准曲线基因表达
摘要:目的利用实时RT-PCR技术建立一种简便、准确的基因表达相对定量方法。方法以正常的人支气管上皮细胞株(16HBE)eDNA为模板5倍系列稀释,分别作DNA聚合酶K(POLK)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因标准曲线。以不同剂量反式二羟环氧笨并芘(anti-BPDE)诱导的16HBE、anti—BPDE转化的16HBE及肺癌细胞株(H1299)cDNA为模板,进行实时定量RT—PCR。以GAPDH基因作为内参照,进行POLK基因表达相对定量。实验数据分别采用2^(-△△CT)法及REST软件分析。结果5倍系列稀释法制作的标准曲线,呈现较好的线型关系(Rsq 0.997)。POLK及GAPDH基因扩增效率分别为117.5%和103.5%。采用2^(-△△CT)法计算出的表达比值均比REST软件分析高。结论实时RT-PCR技术结合REST软件分析是一种简便、准确的基因表达相对定量分析手段。
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