作者：王文天; 彭少麟; 李冬梅; 王冬梅; 王瑞龙...薇甘菊samtrace原核表达westernblot
摘要：为研究水杨酸羧甲基转移酶基因在植物防御系统中的作用，采用RACE法从薇甘菊（Mikania micrantha）cDNA文库中克隆到薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因SAMT全长cDNA，并进行外源表达以及水杨酸诱导模式分析。结果表明，该基因cDNA全长1299bp，其中编码区长1089bp，编码362个氨基酸，Blast显示该基因编码的氨基酸序列与仙女扇（Clarkia brewen）的相似性为74％，证实其主要功能是将水杨酸（saficylic acid，SA）甲基化成水杨酸甲酯（methyl salicylate，MESA），由此将该基因命名为MmSAMT，GenBank登录号为FJ869889。将MmSAMT编码序列克隆至pET-32a（＋）载体，转化Rosetta-gami（DE3）中表达，SDS-PAGE显示单体分子量在40kD左右，与预测结果一致。Western blot显示在20℃、0.05mmol／L IPTG和180r min^-1下诱导6h，可获得较多的可溶性蛋白质。对喷施100μmol／L SA薇甘菊叶片中MmSAMT的转录谱进行研究，该基因的诱导受到SA的激活，48h的表达水平达最高，暗示MmSAMT可能通过催化合成MeSA引发系统获得性抗性，提高抗性防御的警戒等级。
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