作者：李钢; 刘敏; 蒋彦; 乔代蓉; 曹毅盐生杜氏藻cdna文库功能基因组学
摘要：采用Qiagen公司的植物总RNA提取技术、Clonmch公司的Creator^-TM技术平台以及SMART^TM技术进行cDNA文库构建。从杜氏藻中提取出了高质量的总RNA，通过PowerScript反转录酶反转录杜氏藻的总RNA，采用LD-PCR、酶处理等方法对cDNA进行等比例扩增、纯化，同时使用CHROMA SPIN-400柱子将cDNA分段化，最后将长片段连入pDNR-LIB质粒，1．5kV，25μF电转化大肠杆菌JM109，得到含1．5×10^6个克隆子的原始文库，滴度为1．5×10^6cfu ml^-1。结合酶切和PCR，对该文库的质量进行了鉴定和统计，文库的平均片段插入长度为1．5kb。采用烯醇酶和UDP葡萄糖脱氢酶的EST作为同源探针，对文库中的功能基因进行筛选，并采用放射性原位杂交法，对扩增文库进行了初筛和复筛，得到了含这两条基因全编码序列的cDNA，烯醇酶为1．8kb，UDP葡萄糖脱氢酶为1．9kb，为今后对该种进行大规模功能基因组学研究奠定基础。
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