作者：李小月; 何金生; 沈继龙; 汪学龙; 姜山表面抗原基因乙型肝炎病毒克隆序列分析乙肝表面抗原阳性重组腺病毒载体hbsag病毒基因治疗限制性内切酶hbvdnaadr亚型pcr技术核苷酸序列序列同源性s基因序列特异引物序列比对阳性血清鉴定步研究氨基酸
摘要：目的克隆并鉴定乙型肝炎病毒表面抗原基因,为下一步构建该重组腺病毒载体以及进一步研究腺病毒载体的包装及在乙型肝炎病毒基因治疗中的作用.方法参照人HBV adr亚型序列,设计和合成S基因特异引物.应用PCR技术,从含有HBsAg的HBV DNA中扩增目的DNA,通过TA连接将其克隆入pGEM-T easy载体,经限制性内切酶BgIⅡ/Sal I鉴定后,进一步测序鉴定.结果从乙肝表面抗原阳性(HBsAg+)血清中成功提取HBV DNA,并以此DNA为模板,成功扩增出S基因,测序结果与GenBank中注册的相应序列比对,核苷酸序列的同源性高达92%～99%,预测氨基酸序列同源性亦达82%.结论从HBsAg阳性血清中成功克隆出S基因序列,为进一步构建重组腺病毒及后续实验奠定了基础.
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