作者：李鲲 葛银林rna小分子干扰乳腺肿瘤血管内皮生长因子c细胞增殖细胞凋亡
摘要：目的应用经过化学修饰的小干扰RNA（siRNA）在体外抑制血管内皮生长因子C（VEGF-C）基因的表达，探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰技术对乳癌基因治疗的可行性和特异性。方法设计针对VEGF-C基因的siRNA，选用阳离子脂质体Lipofectamine^TM 2000作为转染试剂，以脂质体转染法将双链siRNA导人人乳癌细胞株MCF-7细胞，设立空白对照组（只加无血清无抗生素培养基）、脂质体组（每孔只加Lipofectamine^TM 20000．5μL）、3个siRNA浓度梯度组（50、100、200nmol／L）及siRNASCR组（100nmol／L），用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响，通过Hoechst33258染色观察MCF-7细胞的凋亡，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot分别检测转染前后VEGF-C基因和p53基因的mRNA及蛋白表达变化。结果转染VEGF-C siRNA 48h后MCF-7细胞生长受到抑制，Hoechst 33258荧光染色显示转染siRNA72h后细胞内可见凋亡小体。VEGF-C基因和p53基因mRNA和蛋白水平表达明显降低（F=30．74～114．11，q=5．74-20．75，P〈0．01），空白对照组、脂质体组和siRNA SCR组各指标差异无显著性（P〉0．05）。结论化学修饰的siRNA介导的RNA干扰能下调靶基因VEGF-C的表达和抑制MCF-7细胞增殖，乳癌中p53与VEGF-C表达有关，提示突变型p53可能参与VEGF-C表达的调控。
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