作者：李伦政; 古丽娜尔·艾拜都拉; 杨瑞思; 周...海岛棉胚性细胞超低温保存玻璃化法
摘要：目前棉花转基因技术高度依赖于体细胞胚胎发生方式,而在体细胞胚发生过程中的胚性细胞保存和利用需要继代培养,可能引起保存材料发生遗传变异或导致物种退化,不利于资源保存和利用,而超低温保存能最大限度地保持材料的遗传稳定性。本研究以海岛棉(Gossypium barbadense) XH33胚性细胞为材料,分别从预培养、玻璃化溶液及处理时间、化冻方法以及恢复培养方法等方面进行优化,建立小滴玻璃化法超低温保存新疆海岛棉胚性细胞的方法;进一步通过流式细胞术、SSR分子标记和生理指标检测等方法验证小滴玻璃化法超低温保存后的胚性细胞遗传稳定性。结果表明,4℃条件下,XH33胚性细胞在0.3、0.5、0.7 mol/L梯度浓度蔗糖培养基上预培养3 d,然后在植物玻璃化溶液(plant vitrification solutions 2,PVS2)中装载20 min和脱水20 min;液氮保存12 h后,经40℃水浴解冻,并以0.5、0.7、1.0 mol/L梯度浓度蔗糖溶液洗涤;暗培养3 d后正常培养,细胞存活率高达55.55%。流式细胞术和SSR分子标记结果表明,超低温冷冻并未影响细胞的遗传稳定性;生理指标检测结果显示,冷冻后细胞的生理活性并未发生显著变化。本研究建立了海岛棉胚性细胞小滴玻璃化法超低温保存的技术体系,为海岛棉胚性细胞的长期保存提供了参考依据。
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