作者：林裕胜; 李莎莎; 江锦秀; 张靖鹏; 游伟; ...绵羊肺炎支原体丝状支原体山羊亚种taqman探针荧光定量pcr
摘要：绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Mo)和丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri, Mmc)是引起羊支原体性肺炎(M.pneumonia of sheep and goats, MPSG)的主要病原。为了快速鉴别引起MPSG的主要病原,建立一种可以同时检测Mo和Mmc的双重TaqMan探针荧光定量PCR (Real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)检测方法。根据Mo p113序列和Mmc MLC_1770 (hypothetical protein gene)序列,利用Beacon Designer 7.9结合NCBI Blast软件分析,分别设计出针对Mo和Mmc的特异性引物和探针。通过对引物浓度、探针浓度和退火温度等反应条件的优化,建立了双重TaqMan探针qRT-PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果表明,建立的双重TaqMan探针qRT-PCR的标准曲线相关系数R2分别为0.998和0.999,扩增效率分别为94.8%和97.0%;该方法对其他羊常见病原均无扩增信号,证明该方法具有良好的特异性;该方法对Mo和Mmc的最低检测限均为100 copies/μL,敏感性是常规PCR的100倍;组内和组间变异系数都低于2%,说明重复性好。应用该方法对福建省内收集的187例临床样品进行检测,结果显示,Mo的阳性率为47.6%(89/187),Mmc的阳性率为11.8%(22/187),两种病原体混合感染阳性率为10.2%(19/187)。以上数据结果表明,本研究建立的方法可用于临床上Mo和Mmc的准确、快速检测。本研究为Mo和Mmc的快速检测及流行病学提供了技术支撑。
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