作者：杨城; 姚善泾; 杨志坚; 肖金星; 郑刚酸性蛋白酶分离鉴定毕赤酵母属发酵生物有机肥
摘要：化肥过度使用导致比较严重的耕地退化问题,极大影响了作物的产量与品质。本研究筛选产酸性蛋白酶菌株,结合现酵技术,尝试开发一种新型氨基酸生物有机肥。首先利用透明水解圈法和福林酚法,从鱼粉水解液中筛选得到一株产酸性蛋白酶菌株Zju-c,对其进行形态学观察及26S rRNA分子鉴定,并对鱼粉菌解条件和培养基成分进行部分优化。经生理生化分析发现,该菌株可直接利用大多数糖及少部分醇,能水解酪素、淀粉、明胶以及酒石酸盐,生长速度较快,可耐受13%NaCl;通过BLAST比对,确定为毕赤酵母属Pichia galeiformis (GenBank No. JF781422.1)。最佳发酵培养基成分为300 g/L鱼粉、50 g/L葡萄糖、30 g/L大豆蛋白胨、30 g/L NaCl和0.9 mg/mL Mg2+。在30℃、起始pH 5、3%接种量以及180 r/min的优化发酵条件下振荡培养7 d,以游离氨基酸含量和酶活为发酵水平衡量指标,发酵液中氨基酸含量由最初的29.4±2.1 mg/mL提高至88.4±1.4 mg/mL,酶活由190.2±2.9 U/mL提高到400.1±3.8 U/mL。上述研究结果提示,该菌株在利用发酵鱼粉研制液体生物有机肥中具有较好的应用价值。
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