作者：丁作美; 王媛媛; 石超南; 王红; 张成龙; ...泛素连接酶泛素融合蛋白亚细胞定位细胞核
摘要：E3泛素连接酶作为泛素化途径中的重要调控者参与细胞内多种生物学过程。为了挖掘水稻(Oryza sativa)抗病毒分子中的重要基因,本研究基于前期的研究成果,通过反转录PCR方法(reverse transcription PCR, RT-PCR)克隆得到水稻E3泛素连接酶—泛素融合蛋白(ubiquitin fusion protein, UF)基因的cDNA序列(GenBank No. XM015757177.2)。基序(motif)分析结果显示,OsUF中含有7个保守的motif,其中包含了5个泛素相关motif (Ubiquitin, Rad60-SLD, Ubiquitin-2, Rad60-SLD-2和DUF2407)和2个非泛素化相关motif (RibosomalL4F01020和zf-C4pol);利用Gateway同源重组体系将OsUF cDNA全长重组到融合表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的表达载体pEarleyGate103上,然后通过农杆菌介导(Agrobacterium-mediated)的烟草(Nicotiana benthamiana)瞬时表达系统,在本氏烟叶片中瞬时表达OsUF蛋白。亚细胞定位和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染核结果显示,OsUF蛋白定位在细胞核。Western blot结果显示,OsUF与GFP蛋白融合并正确表达。本研究为深入分析OsUF可能参与的生物学过程以及解析水稻抗病毒机理提供了理论资料。
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