作者：吕明; 罗军; 石恒波; 田慧彬; 王平奶山羊成肌细胞分离鉴定
摘要：成肌细胞（myoblast）具有自我更新和多向分化的能力，对骨骼肌的再生和修复起着重要作用。为了建立奶山羊（Capra hircus）肌细胞的体外分离纯化、培养和鉴定的方法，了解其增殖和成肌特性，为奶山羊肌肉发育调控机理研究提供实验材料，本研究采集西农萨能奶山羊羔羊骨骼肌组织，采用I型胶原酶和胰酶两步酶消化法分离细胞，结合差速贴壁纯化得到成肌细胞，利用qRT-PCR和免疫荧光染色法对分离纯化后的成肌细胞进行进一步鉴定。细胞形态学观察结果显示，分离纯化后的成肌细胞呈梭形，生长状态良好；qRT-PCR和免疫荧光染色结果显示，生肌调节因子5（myogenic regulatory factor5, Myf5）和成肌决定因子（myogenic differentiation factor, MyoD）、结蛋白（desmin）呈阳性表达，纯化后的成肌细胞纯度大于95%；诱导分化后的成肌细胞能够相互融合形成肌管，成肌特异性标志蛋白肌球蛋白重链（myosin heavy chain, MYHC）呈阳性表达。本研究建立了奶山羊成肌细胞体外分离培养的方法，并成功获得了高纯度的具有增殖和成肌特性的成肌细胞，可用于奶山羊肌肉发育调控研究。
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