作者：秦凌月; 邓西平; 杨淑慎非生物胁迫启动子顺式作用元件
摘要：甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH）是糖酵解过程中的关键酶。作为GAPDH的亚型,GAPC（cytosolic glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,但是关于GAPC在非生物胁迫应答中作用的研究却并不充分。本研究从中国春小麦（Triticum aestivum）中克隆出了TaGAPC1基因（GenBank No. KU246046）,其编码337个氨基酸,并克隆出基因上游973 bp的序列,将其命名为P973。通过融合绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）报告基因,使用基因枪法瞬时转化洋葱（Allium cepa）表皮细胞进行亚细胞定位,结果显示TaGAPC1蛋白定位于细胞膜上。使用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）技术,分析TaGAPC1基因在根、茎、叶中,以及干旱（PEG8000）、盐（NaCl）、脱落酸（abscisic acid, ABA）和低温（4℃）非生物胁迫下的表达模式。结果表明TaGAPC1基因在叶、根、茎中的表达量依次下降,在PEG8000、NaCl和ABA胁迫下的表达量显著上升,但对4℃的响应不明显。根据PLACE （http：//www.dna.affrc.go.jp/PLACE/）和PlantCARE （http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）数据库分析,P973启动子序列中包含响应干旱、ABA、低温和创伤等胁迫的顺式作用元件,如干旱应答元件（drought-responsive element,DRE）、激素应答元件包括ABA应答元件（ABA-responsive element, ABRE）、MYB结合位点（MYB-binding site, MBS）和WUN-motif等。根据顺式作用元件的分布,扩增得到5个启动子5＇端缺失片段,分别命名为P844、P738、P605、P475和P256。构建6条启动子序列融合β-葡萄糖苷酸酶基因（β-glucuronidase, GUS）的表达载体,并瞬时转化烟草（Nicotiana batacum）植株,测定PEG8000、NaCl、ABA和4℃胁迫下各启动子驱动的GUS酶活。结果表明,-973~-605启动子区域在TaGAPC1基因应答PEG8000和NaCl胁迫中具有关键作用,-973~-4
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
