作者：贺红利; 牛陆; 杨静; 邢国杰; 赵倩倩; 杜...大豆多肽融合蛋白体外源重组蛋白
摘要：大豆（Glycine max）种子的高水平蛋白合成和积累能力,为外源重组蛋白的高效表达提供了理想的表达宿主。为进一步提高外源蛋白在大豆种子中的表达水平,本研究基于多肽融合策略,研究玉米（Zea mays）醇溶蛋白γ-Zein对外源蛋白在大豆种子中积累水平的影响。采用农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导法,分别将大豆种子特异性启动子基因β＇-伴球蛋白基因启动子（β-conglycininalpha subunit promoter, BCSP）驱动的绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）编码基因和Zein-GFP基因导入栽培大豆品种,共获得Zein-GFP转基因植株41株,GFP转基因植株46株。反转录PCR（reverse transcription PCR, RT-PCR）和Western blot检测表明,外源基因Zein-GFP和GFP在转基因大豆种子中均能够正常转录和翻译。选取外源基因mRNA表达水平相近的T3代转基因大豆株系进行酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）分析表明,转基因大豆种子中融合蛋白Zein-GFP平均表达水平为1.51%TSP （1.37%-1.60%TSP）（可溶性蛋白总量, total soluble protein）,未融合蛋白GFP平均表达水平为0.14%TSP（0.13%-0.15%TSP）。融合蛋白Zein-GFP在转基因大豆种子中的积累水平较GFP提高10.78倍。激光共聚焦扫描分析进一步表明,融合蛋白Zein-GFP在转基因大豆种子中主要以蛋白体的形式存在,而未融合GFP蛋白则主要分布在胞质中。本研究结果表明,γ-Zein多肽融合促进了重组蛋白在细胞蛋白体中的积累,并显著提高其在大豆种子中的表达水平。本研究为加快大豆种子反应器的应用提供依据。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
