作者：丁爱琴; 于洋; 李绍翠; 刘庆超; 王奎玲; ...切花月季基因克隆盐胁迫
摘要：天冬氨酸蛋白酶（aspartic proteases, APs）是植物体内一类蛋白水解酶，在植物的生长发育过程中发挥极为重要的作用。为了明确月季（Rosa hybrida）中APs的初步功能，本研究以切花月季萨蔓莎（R. hybrida ＇Samantha＇）为材料，采用cDNA末端快速扩增PCR （rapid amplification of cDNA ends, RACE-PCR）的方法克隆到一个天冬氨酸蛋白酶基因（APs），命名为RhASP1（GenBank No.： MG384616），通过qRT-PCR和异源过表达拟南芥（Arabidopsis thaliana）的方法对RhASP1的表达特性和在拟南芥中的生物学功能进行了初步研究。结果表明RhASP1开放阅读框（ORF）包含1 287 bp，编码428个氨基酸，属于B类型APs；RhASP1的表达受盐处理诱导，乙烯处理24 h和失水胁迫3 h显著提高了RhASP1的转录水平（P＜0.05）。通过农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导法转化野生型拟南芥，获得3个超表达转基因株系，并对盐胁迫下转基因植株的表型和生理指标进行了测定。不同盐胁迫浓度处理下，RhASP1转基因植株的发芽率、初生根伸长量和侧根数目均显著高于野生型拟南芥（P＜0.05）；与野生型相比较，RhASP1转基因株系的叶片和植株染色较浅，O2^-·和H2O2相对积累量少，且显著低于野生型植株（P＜0.05）。上述结果初步明确了RhASP1的生物学功能，为月季的逆境育种提供了基因储备和理论参考。
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