作者：张雪莹; 罗军; 陈筱影; 田慧彬; 赫秋亚; ...西农萨能奶山羊启动子基因克隆活性分析
摘要：过氧化物酶增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPART）是核受体家族成员，作为配体激活型转录因子，在调控脂肪酸代谢和脂滴形成等方面发挥重要作用。为分析PPARy基因启动子结构及功能，完善奶山羊（Capra hircus）乳脂代谢调控网络，本研究以西农萨能奶山羊全血DNA为模板，通过PCR技术扩增PPARγ基因5’侧翼序列，并克隆得到7个长度不同的缺失片段，分别连接pGL3-basic载体构建重组体，利用双荧光素酶报告系统检测各重组质粒活性，结合生物信息学分析确定其转录核心区域；并通过启动子定点突变和过表达CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT enhancer binding protein alpha，C／EBPα）研究转录因子C／EBPa对PPARγ基因的转录调控。结果表明，克隆得到的艘ARy基因启动子序列全长为2328bp（包含转录起始位点上游2181bp，GenBank登录号：MG770492．1），启动子上无典型的真核生物元件TATA框，但存在C／EBPα、肝X受体（1iver X receptor，LXR）、胆固醇调节元件结合蛋白（sterol-regulatory element binding protein，SREBP）及特异性蛋白l（specificity protein1，SPl）等多个转录因子结合位点；缺失片段分析结果表明，PPARγ7基因启动子核心区域位于转录起始位点上游194～108bp，且启动子上存在负调控元件；转录因子C／EBPa通过结合位于启动子上游119bp处的C／EBPa结合元件而调控PPARγ基因的转录。本研究为后续开展PPARγ调控羊奶脂肪酸代谢的机理研究提供了资料。
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