作者：庄瑞蓉; 储文婷; 赵闪闪; 陈坤; 谢文萍; ...花生启动子gus染色顺式作用元件
摘要：含有核苷酸结合位点（nucleotide-binding site，NBS）和富亮氨酸重复（1eucine-rich repeat，LRR）结构域的NBS-LRR类抗性基因在植物抗病防御反应中起着重要作用，启动子是调控基因表达的重要顺式元件。为研究花生（Arachis hypogaea）青枯病候选基因3（bacterial wilt candidate resistance gene 3 of Arachis hypogaea，AhBW3）表达调控机制，本研究前期克隆获得了1个青枯病抗性相关的NBS-LRR类基因，发现含有TIR结构域的全长序列（AhBW3，GenBankNo．HQ637177．1）和不带TIR结构域序列（AhqBW3）的转基因烟草（Nicotlana tabacum），对青枯病的抗性响应存在差异。为研究AhBW3表达调控花生对青枯菌的响应机制，本研究利用电子克隆技术，从抗青枯病花生品种粤油92基因组DNA中克隆AhBW3基因上游1978bp序列，命名为pAhBW3。通过生物信息学分析发现，AhBW3含有多个TATA．box和CAAT-box等真核生物启动子核心元件，还包括根特异表达元件、光调控元件、抗逆境响应等元件。通过构建GUS融合表达载体并遗传转化拟南芥（Arabidopsis thaliana），转基因拟南芥的GUS组织化学活性表达结果显示，GUS在拟南芥根部表达量最高，莲座叶的表达量亦高，在茎和花中表达量较弱，说明pAh~W3是根和叶丰富表达的启动子。通过qRT-PCR分析，显示pAhBW3调控的GUS基因能响应外源激素、干旱、高盐的胁迫，表现不同程度的上调应答。本研究为pAhBW3启动子的利用和AhBW3基因在花生的抗逆反应机制的进一步研究提供了科学依据。
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